Como fazer e observar a epiderme da cebola ao microscópio
A é simples na teoria, mas tem alguns detalhes que fazem diferença no resultado. O método clássico de preparar uma lâmina de epiderme da cebola para observação celular envolve poucos materiais, mas exige um pouco de prática para obter cortes finos o suficiente para a luz passar.
epiderme da cebola
Você precisa de uma cebola roxa ou branca, porta-lâminas, lâminas, pinça, pincel, conta-gotas, iodo ou azul de metileno, microscópio e água destilada. A cebola roxa funciona melhor porque a pigmentação natural das células permite observar sem corante, mas o contraste é mais difícil de ajustar. A branca exige coloração obrigatória para ver algo útil. Retire um dos dentes da cebola e quebre-o ao meio. Olhe para a face interna de uma das escamas. Na porção curva, onde o tecido se encontra, a epiderme se destaca como uma película fina e transparente. É ali que você vai trabalhar. Pegue a pinça, faça um pequeno corte em forma de losango de cerca de 5 milímetros por lado e levante a camada com a ponta da pinça. Puxe devagar. O ideal é obter uma tira única, sem camadas de tecido sobrando grudada. Se vier camadas grossas, a luz não atravessa e você só vai enxergar um borrão escuro.
Coloque a tira sobre a lâmina com a face interna voltada para cima. Adicione uma gota de solução colorante. Se estiver usando iodo, dilua uma parte de lugol para três de água. Azuis de metileno podem ser usados na concentração comercial mesmo, mas ficam muito intensos se a célula absorver demais. Espere entre trinta segundos e um minuto. Tempo demais e o fundo da lâmina fica todo manchado. Tempo de menos e os núcleos mal aparecem. Retire o excesso com papel absorvente, posicionando-o na borda oposta à gota. Cubra com o porta-lâminas inclinando-o lentamente para evitar bolhas de ar. Bolhas grandes interferem na focalização e distraem na hora de identificar as estruturas. Se restaram muitas, pressione levemente o porta-lâmina com uma pinça na borda para forçar a saída do líquido em excesso.
No microscópio, comece com a objetiva de menor aumento, geralmente 4x ou 10x. Encontre a região onde a epiderme está mais fina e centralize. Suba para 40x para ver os contornos das células e os núcleos. Use apenas o parafuso micrométrico no aumento maior. Com objetiva de imersão, aplique uma gota de óleo antes de focar. O que você vai ver são células alongadas, encaixadas como tijolos, formando uma parede celular bem definida. Os núcleos aparecem como structures mais escuras, geralmente próximos à periferia da célula, empurrados pela grande vacúolo central. Se a coloração foi bem feita, os nucléolos também podem aparecer como pontos mais densos dentro do núcleo. As junções entre células são nítidas porque a lamela média separa as paredes celulósicas de cada unidade.
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Um problema que enfrentei na prática foi com cebolas estocadas há muito tempo. A epiderme desse tipo de cebola tende a ser mais espessa e fibrosa, o que dificulta arrancar camadas finas. O corte em losango não resolveu. A solução foi cortar uma fatia mais grossa da escama, amolecer em água morna por dois minutos e então tentar separar as camadas com o pincel em vez da pinça. O resultado foi bem melhor.
Dicas práticas que não aparecem nos manuais
Primeiro, não use água da torneira se puder evitar. O cloro e os sais minerais deixam resíduos na lâmina que criam reflexos e reduzem a transparência. Água destilada ou deionizada resolve. Segundo, a espessura da tira é o fator mais importante. Uma camada duas vezes mais grossa já significa redução drástica de qualidade de imagem. Terceiro, se o contraste estiver muito baixo mesmo com coloração, tente fechar um pouco o diafragma do condensador. Isso aumenta o contraste às custas de um leve ganho de nitidez nas bordas. Outro ponto que vale mentionar é a diferença entre cebola roxa e branca na hora de escolher o corante. Na roxa, o antocianina do vacúolo já dá um tom arroxeado que mascara o núcleo se você usar azul de metileno junto. Nesse caso, o iodo diluído funciona melhor porque realça os núcleos em amarelo-marrom sem competir com a pigmentação existente. Na cebola branca, o azul de metileno é mais eficiente para visualizar a parede celular e o citoplasma.
A preparo da lâmina leva cerca de cinco a dez minutos na primeira vez. Depois de treinar, fica em três minutos. A montagem definitiva pode durar horas ou dias dependendo do selante usado. Lâminas simples, sem banho de parafina ou resina, começam a secar em algumas horas e as células se deformam. Para observações educacionais pontuais, isso não é problema. Para documentação ou análise posterior, monte com meio de montagem adequado. Há limitações importantes a considerar. A epiderme da cebola é um tecido simples, adequado para demonstrar estrutura celular básica, mas não revela organelas de pequeno porte nem detalhes da membrana plasmática. Para essas estruturas, é necessário preparação de ultraestrutura com microscopia eletrônica. Também não é um modelo ideal para estudar divisão celular, pois as células epidérmicas são maduras e pouco prolíferas. Se o objetivo é observar mitose, a raiz de cebola em germinação oferece meristema com muito mais células em divisão ativa.
Para quem quer um guia completo com ilustrações e variantes do método, o protocolo padrão do Ministério da Educação brasileiro está disponível gratuitamente. O link direto para o material de apoio laboratorial é: portal.dprofessor.mec.gov.br. Há também materiais complementares do Instituto Butantan e do laboratório de biologia celular da USP que detalham técnicas avançadas de montagem e fixação.
